Diabetologia：启动时但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现显现出口内自身免疫球蛋白到显现显现出1HG冠心病医学病征的实质性领军在学龄前中后期就有更好的描述，多个口内自身免疫球蛋白白血病的学龄前当则有70%在胰岛素转换后10短期内患有冠心病，而随访15年的学龄前这一数量减低到84%。相对于之下，九成医学1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的确诊系统会还没有赢取更进一步的归纳。

越来越多的人开始应用于分期系统会来表述1HG冠心病的实质性：生物体在显现显现出多种口内自身免疫球蛋白时进入第1阶段，显现显现出血糖所致时进入第2阶段，显现显现出病征时进入第3阶段。一些多发口内自身免疫球蛋白白血病的生物体，在1期和2期，实质性较太快，并蓬勃发展为确诊的1HG冠心病。我们以前描述了一分组在首次检验到多种口内自身免疫球蛋白样本后仅仅10年无冠心病的极太快实质性者，这分组病人人数少，但外观上并不指明。随后，我们发现口内自身抗原甲基化CD8+T细胞核中间体在实质性比较太快的病人当中基本不假定，但在最近确诊和依然假定的冠心病病人当中很容易检验到。这可能确实，与实质性病人相对于，这些病人自身免疫中间体的平衡减弱。

早期归纳确实，尽管平衡性T细胞核(Treg)数量正常，但冠心病病人假定一些功能性缺陷，其当中都有对IL-2的中间体能力减少。此外，冠心病病人当中的物理现象CD4+T细胞核可能对平衡不具抵抗性，表现为物理现象T细胞核的可借减弱，自然产生的Treg和肾脏产生的可借Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞核当中IL-2中间体减弱。本归纳的用以是描述了CD4+平衡性T细胞核(Treg)在一小群极比较太快实质性者当中的外观上，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方式：BOX归纳是一项以人群为基础的斜向归纳，在21岁所列确诊的病人亲属当中检验1HG冠心病的可怕心理因素。我们以前描述了依然比较太快实质性者的外观上，他们保持一致多重口内自身免疫球蛋白白血病超过10年，但没有显现显现出冠心病的医学病征，太快性或非完成性自身免疫。随后，10名独自保持一致无冠心病并愿意提供大量血液样本的比较太快实质性者纳入T和B细胞核功能性归纳。在目前的归纳当中，8名太快实质性者(SP分组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的口内自身免疫球蛋白白血病。所有的参与者都东南面1HG冠心病实质性的1期，尽管一些人随后失去了口内自身免疫球蛋白对某些抗原的白血病中间体，然而，一名病人已经东南面2期仅仅6年，但没有显现显现出医学病征，一名病人被诊断为冠心病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳当中对该NADPH完成了单独检验。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，换用多参数流式细胞核法术和T细胞核可借次测试检验NADPH当中Treg的高频领军、表HG和功能性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无监督聚类归纳，检验Treg表HG。

结果：与保健NADPH相对于，来自太快实质性体的遗忘CD4+T细胞核的监督聚类结果显示，诱导的遗忘CD4+ Treg高频领军减低，与糖皮质激素可借的TNFR方面蛋白(GITR)理解减低有关。一名HbA1c上升的病人与实质性比较太快者和匹配的对照分组相对于，Treg曲谱有所完全相同。功能性归纳确实，与保健NADPH相对于，来自比较太快实质性体的Treg酪氨酸的CD4+物理现象T细胞核可借值得注意受损。表现为对物理现象CD4+T细胞核CD25和CD134理解的可借减低。

平面图1 熟悉的表HG归纳结果显示，CD4+Treg亚HG在太快实质性描述符当中减低。由FlowSOM作用于的Treg寝室，汇聚在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标示物理解鉴定显现出10个元簇:遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)应用于9个完全相同Treg标示作用于的10个元簇的MST。每个端口代表一个坦克部队(100个坦克部队)，大得多的元坦克部队(10个元坦克部队)在端口分组周围手工。每个端口当中的饼平面图声称单个标示的理解高至。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示适度标示理解。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于平面图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的基岩。(e-l)比较丰度为每个metacluster装线或平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核(l)。粉色红色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的归纳表明证实，Treg高频领军的减低是实质性比较太快的红色。分级门控(a - f)和橄榄归纳(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的关联性。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解完成分离，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)分组以及NADPHSP 606(粉色)当中CD25+ cd127的高频领军概述平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装线或平面图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)橄榄簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，斜线突显现出的簇被辨识为SP和HD描述符两者之间的完全相同。(j)装线或平面图结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)分组当中，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比较丰度(数量)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表HG(粉色)和Treg标示比较理解与背景理解(粉色);上列，内核Treg_3;上头即刻，内核Treg_4。背景与所有其他簇当中标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

平面图3 与保健献血者相对于，实质性比较太快者遗忘treg的GITR减低。每个遗忘CD4+T细胞核元簇(遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的理解热平面图(sp606不都有在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇当中所有HD(紫色)、所有SP(粉色)和SP 606(粉色)的FlowSOM GITR理解结合，结果显示直方平面图(c)和概述平面图(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(粉色)所有NADPH都有，p< 0.05(粉色)NADPHSP 606和匹配的HD不都有在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR理解，从分级门控，从所有HD(紫色)、所有SP(粉色)和SP 606(粉色)结合，结果显示直方平面图(e)和概述平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

平面图4 来自比较太快实质性的CD4+ treg细胞核高度集中物理现象CD4+T细胞核的能力减少。SP分组用粉色的线或和红色声称，HD分组用黑色的线或和红色声称，粉色的线或/红色声称NADPHsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示为CFSE, Treg按推论的数量氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，人才3紧接著完成流式细胞核法术检验。(a-d)与CD4+反之亦然者比较应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE可借(a,e)和CFSE可借比领军(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可借比领军。应用于白血病对照(诱导的响应细胞核不含treg)计算可借比领军。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 物理现象CD4+T细胞核对比较太快实质性的T细胞核诱导的可借更适合于。SP分组用粉色的线或和红色声称，HD分组用黑色的线或和红色声称，粉色的线或/红色声称NADPHsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示，treg按推论的数量氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠诱导细胞核，人才3紧接著完成流式细胞核法术(CD25反染)和细胞核因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同完成人才。(a,b) CFSE可借(a)和CFSE可借花红(b)。(c,d) CD25可借花红(c)和CD134可借花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才当中的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显现出的结论是，来自比较太快实质性子的诱导遗忘CD4+Treg在GITR理解当中赢取了扩展和多样，务实了进一步归纳Treg在1HG冠心病不确定性生物体当中的异质性的必要性。

原文显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28